sequenza del genoma trapiantato con successo

Il donatore genoma è stato metilato nelle cellule native M. mycoides e è quindi protetto contro le restrizioni durante la trapianto da un donatore di cellule native (10). Tuttavia, il genomi batterici cresciuti in lievito sono metilato e quindi sono non protetti dal sistema di restrizione unico del cellula ricevente. Siamo stati in grado di superare questa limitazionebarriera metilante il DNA donatore con purificato metilasi o greggio M. mycoides o estratti capricolum M., o semplicemente interrompere sistema di restrizione della cellula ricevente (8). Ora abbiamo unito tutte le nostre precedentemente stabilito procedure e la relazione di sintesi, il montaggio, la clonazione, e trapianto con successo il 1,08-MBP M. mycoides JCVI-syn1.0 genoma, per creare una nuova cella controllata da questa genoma sintetico. Risultati Sintetico design genoma Struttura della M. mycoides JCVI-syn1.0 genoma si è basata sul estremamente preciso finito sequenze del genoma di due ceppi di laboratorio di M. mycoides sottospecie GM12 Capri (8, 9) (11). Uno era il donatore del genoma usato da al Lartigue et al. [GenBank adesione CP001621] (10). L’altro era un ceppo creato da trapianto del genoma che era stata clonata e costruito nel lievito, YCpMmyc1.1-ΔtypeIIIres, [GenBank adesione P001668] (8). Questo progetto è stato criticamente dipende dalla precisione di queste sequenze. Anche se riteniamo che sia finito M. mycoides genoma sequenze sono affidabili, ci sono 95 siti in cui differiscono. Abbiamo iniziato a progettare il genoma sintetico prima che sia sequenze erano finiti. Di conseguenza, la maggior parte delle cassette sono stati progettati e sintetizzati basato sulla CP001621 sequenza (11). Quando fu finito, abbiamo scelto di utilizzare il sequenza del genoma trapiantato con successo da lieviti (CP001668) come riferimento il nostro progetto (ad eccezione che abbiamo mantenuto la typeIIIres gene intatto).

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