Le alternative intraprese e l’assemblaggio

Alternate cloni sono stati selezionati, sequenza verificati, e si è trasferito al prossima assemblea fase (11). Assemblea degli intermedi sintetici da 100 kb. Il pool 10-KB assemblee e dei loro vettori di clonazione sono stati rispettivamente trasformato in lievito come sopra per la produzione di montaggio 100 kb intermedie (11). I nostri risultati indicano che i prodotti non può essere mantenuto stabilmente in E. coli DNA ricombinato in modo doveva essere estratto dal lievito. Multiplex PCR è stata effettuata su cloni lieviti selezionati (fig. S3 e S2 tabella). Perché ogni 10 KB di assemblaggio intermedio era rappresentata da una coppia di primer in questa analisi, la presenza di tutti ampliconi suggerirebbe un concentrato di 100 kb intermedi. In generale, il 25% o più dei cloni selezionati conteneva tutti gli ampliconi previsto per un montaggio completo. Uno di questi cloni è stato selezionate per ulteriori controlli. Circolare plasmide DNA è stato estratti e imprese su un gel di agarosio accanto ad un supercoiled marker. Il successo assemblee di seconda fase con il vettore sequenza sono circa 105 kb di lunghezza (fig. 2b). Quando tutti ampliconi sono stati prodotti PCR multiplex, un assemblea di seconda fase intermedia della dimensione corretta era generalmente prodotti. In alcuni casi, tuttavia, piccole delezioni si è verificato. In altri casi, più frammenti di 10 kb sono stati assemblati, che ha prodotto un più grande assemblea di seconda fase intermedi. Fortunatamente, queste differenze potrebbero essere facilmenterilevati su un gel di agarosio prima completa del genoma montaggio. Completare il montaggio del genoma. In preparazione per la finale fase di montaggio, è stato necessario isolare microgrammi quantitativi di ciascuna delle assemblee 11 secondo stadio (11). Come segnalati (14), plasmidi circolare le dimensioni della nostra seconda fase assemblee poteva essere isolato dal sferoplasti lievito dopo un alcalino-lisi procedura.

Alternate cloni sono stati selezionati, sequenza verificati, e si è trasferito al prossima assemblea fase (11). Assemblea degli intermedi sintetici da 100 kb. Il pool 10-KB assemblee e dei loro vettori di clonazione sono stati rispettivamente trasformato in lievito come sopra per la produzione di montaggio 100 kb intermedie (11). I nostri risultati indicano che i prodotti non può essere mantenuto stabilmente in E. coli DNA ricombinato in modo doveva essere estratto dal lievito. Multiplex PCR è stata effettuata su cloni lieviti selezionati (fig. S3 e S2 tabella). Perché ogni 10 KB di assemblaggio intermedio era rappresentata da una coppia di primer in questa analisi, la presenza di tutti ampliconi suggerirebbe un concentrato di 100 kb intermedi. In generale, il 25% o più dei cloni selezionati conteneva tutti gli ampliconi previsto per un montaggio completo. Uno di questi cloni è stato selezionate per ulteriori controlli. Circolare plasmide DNA è stato estratti e imprese su un gel di agarosio accanto ad un supercoiled marker. Il successo assemblee di seconda fase con il vettore sequenza sono circa 105 kb di lunghezza (fig. 2b). Quando tutti ampliconi sono stati prodotti PCR multiplex, un assemblea di seconda fase intermedia della dimensione corretta era generalmente prodotti. In alcuni casi, tuttavia, piccole delezioni si è verificato. In altri casi, più frammenti di 10 kb sono stati assemblati, che ha prodotto un più grande assemblea di seconda fase intermedi. Fortunatamente, queste differenze potrebbero essere facilmenterilevati su un gel di agarosio prima completa del genoma montaggio. Completare il montaggio del genoma. In preparazione per la finale fase di montaggio, è stato necessario isolare microgrammi quantitativi di ciascuna delle assemblee 11 secondo stadio (11). Come segnalati (14), plasmidi circolare le dimensioni della nostra seconda fase assemblee poteva essere isolato dal sferoplasti lievito dopo un alcalino-lisi procedura.

Annunci

One thought on “Le alternative intraprese e l’assemblaggio

Rispondi

Inserisci i tuoi dati qui sotto o clicca su un'icona per effettuare l'accesso:

Logo WordPress.com

Stai commentando usando il tuo account WordPress.com. Chiudi sessione / Modifica )

Foto Twitter

Stai commentando usando il tuo account Twitter. Chiudi sessione / Modifica )

Foto di Facebook

Stai commentando usando il tuo account Facebook. Chiudi sessione / Modifica )

Google+ photo

Stai commentando usando il tuo account Google+. Chiudi sessione / Modifica )

Connessione a %s...