Fig. 2. L’analisi degli intermedi di montaggio.

(A) Non io e SBF faccio doppio digestione analisi di restrizione di montaggio 341 – 350 purificato da E. coli. Questi enzimi di restrizione di rilascio dei frammenti vettore (5,5 kb e 3,4 kb) dal-10 kb Inserisci. Inserisci il DNA è stato separato dal DNA di vettore su un 0,8% E-gel (Invitrogen). M indica la scala del DNA di 1 kb (Biolabs New England, NEB).
(B) Analisi del montaggio 501 – 600 purificato da lievito. I cerchi a 105 kb (100 kb inserire più 5-kb vettore) sono stati separati dal lievito lineare DNA cromosomico di un 1% gel mediante l’applicazione di 4,5 V / cm per 3 ore. S indica il BAC-Tracker supercoiled DNA ladder (Epicentre).
(C) Non ho restrizione digestione analisi delle undici assemblee ~ 100 kb purificato da lievito. Questi frammenti di DNA sono stati analizzati da FIGE su un 1% gel di agarosio. Le dimensioni inserto previsto per ogni assemblea è indicato. λ indica la scala lambda (NEB).
(D) Analisi delle 11 assemblee riunite in (c) a seguito cattura topologiche del DNA circolare e non ho la digestione. Un quarantesimo del DNA usato per trasformare il lievito è rappresentati.

(A) Non io e SBF faccio doppio digestione analisi di restrizione di montaggio 341 – 350 purificato da E. coli. Questi enzimi di restrizione di rilascio dei frammenti vettore (5,5 kb e 3,4 kb) dal-10 kb Inserisci. Inserisci il DNA è stato separato dal DNA di vettore su un 0,8% E-gel (Invitrogen). M indica la scala del DNA di 1 kb (Biolabs New England, NEB). (B) Analisi del montaggio 501 – 600 purificato da lievito. I cerchi a 105 kb (100 kb inserire più 5-kb vettore) sono stati separati dal lievito lineare DNA cromosomico di un 1% gel mediante l’applicazione di 4,5 V / cm per 3 ore. S indica il BAC-Tracker supercoiled DNA ladder (Epicentre). (C) Non ho restrizione digestione analisi delle undici assemblee ~ 100 kb purificato da lievito. Questi frammenti di DNA sono stati analizzati da FIGE su un 1% gel di agarosio. Le dimensioni inserto previsto per ogni assemblea è indicato. λ indica la scala lambda (NEB). (D) Analisi delle 11 assemblee riunite in (c) a seguito cattura topologiche del DNA circolare e non ho la digestione. Un quarantesimo del DNA usato per trasformare il lievito è rappresentati.