Fig. 1. Il montaggio di una sintetica M. mycoides genoma in lievito

Un genoma sintetico M. mycoides è stato assemblato da 1.078 cassette di DNA sovrapposti in tre fasi. Nel primo passo, 1.080-bp cassette (frecce arancioni), prodotto da sovrapposizione oligonucleotidi sintetici, sono stati ricombinati in confezioni da 10 pezzi per la produzione di assemblaggi 109 ~ 10 KB (Frecce blu). Questi sono stati poi ricombinati in confezioni da 10 a produrre undici assemblee ~ 100 KB (frecce verdi). Nel fase finale di montaggio, questi frammenti undici ricombinato nel genoma completo (cerchio rosso). Con theexception di 2 costrutti che sono stati enzimaticamente pieced insieme in vitro (27) (frecce bianche), le assemblee sono state effettuate da in vivo ricombinazione omologa in lievito. Grande variazioni rispetto al genoma naturale sono mostrati in giallo cerchi. Questi includono 4 Regioni filigranata (WM1-WM4), una regione da 4 KB che è stato volutamente cancellato (94 quinquies), e elementi per la crescita nel lievito e il trapianto di genoma. In Inoltre, vi sono 20 località con nucleotide polimorfismi (asterischi). Coordinate del genoma sono rispetto al primo nucleotide del M. mycoides naturale sequenza. La sequenza è progettato 1.077.947 bp. Il I luoghi della Asc e BssH siti di restrizione II sono mostrate. Cassette 1 e 800-810 sono stati inutili e rimossi dal la strategia di assemblaggio (11). Cassetta 2 sovrapposizioni cassette 1104 799 e cassette sovrapposizioni cassetta 811.